7.2.4 Procedimiento.

El día de la prueba rasurar completamente la piel del lomo de los animales hacia ambos lados de la columna vertebral, sobre  un  área suficientemente larga y evitando la irritación o el trauma  mecánico.

Retirar el pelo suelto del área por medio de vacío. Si  es  necesario, frotar la piel ligeramente con   alcohol  diluido y secarla  antes de inyectar.

Emplear dos animales para cada extracto de la muestra, utilizando un lado del lomo para inyectar intracutáneamente la muestra y el  otro para el blanco, en el número de sitios y la dósis que aparecen en la siguiente tabla.

TABLA 5. PROCEDIMIENTO DE INYECCION INTRACUTANEA

Extracto de muestra                     No. de sitios                    Dosis

y   blanco                                          (por animal)                    cm³

^{Extracto de muestra.                                                        5                                                               0.2 cm3}

^{Blanco.                                                                              5                                                               0.2 cm3}

Evitar tocar los sitios de inyección al manejar los animales.

Examinar los sitios de inyección para detectar  alguna  evidencia de reacción  tisular tal como eritema, edema, necrosis, para facilitar la lectura en  los  sitios  de  inyección,  si  es  necesario,  tratar suavemente la piel con alcohol diluido.

Observar a los animales a las 24 h, 48 h y 72 h después de la inyección. Rasurar la piel cuantas  veces  sea  necesario  durante el periodo de observación.

7.2.5 Interpretación.

Si ninguno de los animales durante el periodo de observación presenta una reacción promedio al extracto de muestra significativamente no mayor al promedio del blanco, la muestra  cumple con las especificaciones  de  esta  prueba. Si en el periodo de observación la reacción  promedio  para  la  muestra  es  mayor a la reacción promedio del blanco, repita la prueba utilizando tres conejos adicionales. En la repetición de la prueba, la  reacción  promedio al extracto de muestra en ninguno de los tres conejos no debe  ser significativamente mayor que la reacción promedio del blanco.

7.3 Determinación de metales pesados.

7.3.1  Equipo.

7.3.1.1 Autoclave.  Emplear  un  autoclave  capaz  de  mantener   una temperatura de 394 K ± 2 K (121°C ± 2°C),  equipado  con termómetro y  un calibrador de presión.

7.3.1.2 Balanza analítica.

7.3.1.3 Tubos de comparación de color o de Nessler.

7.3.2 Reactivos.

-        Solución de ácido acético 1 N.

-        Acido nítrico.

-        Nitrato de plomo.

-        Solución tipo concentrada de nitrato de plomo.

-        Acido sulfúrico.

7.3.2.1 Solución tipo concentrada de nitrato de plomo.

7.3.2.1.1 Preparación.

Disolver 159.8 mg de nitrato de plomo en 100 cm³ de agua, a la  que se ha agregado 1 cm³ de ácido nítrico, en seguida diluir  con  agua hasta 1000 cm³. Esta solución se guarda en recipientes de  vidrio que no contengan sales solubles de plomo, 1 cm³ = 0.1 mg de plomo.

7.3.2.2  Solución tipo de plomo.

Preparar la solución el mismo día de la prueba.

Diluir 10 cm³ de la solución tipo concentrada de nitrato de  plomo con agua destilada hasta 100 cm³. Cada centímetro cúbico de la solución tipo de plomo equivale a 0.01 mg  de plomo.

7.3.3 Preparación de la muestra.

Seleccionar una muestra del producto  a  probar  y  cortarla   en porciones de tal manera que se obtenga un área de 100 cm², colocar  en un recipiente adecuado para extracción, añadir 300 cm³ de agua purificada y tapar con un vaso de boca ancha invertido.

Introducir el recipiente conteniendo la muestra  al  autoclave  y someterlo a una temperatura de 394 K ± 2 K (121°C ± 2°C) durante 30 min.

(Ajustar el autoclave de tal manera que la temperatura se alcance en un tiempo de 2 a 5 min.).

Enfriar el recipiente y decantar utilizando un  tamiz  de acero inoxidable para retener la muestra en el recipiente. Enjuagar con 100 cm³ de agua purificada y agitar suavemente, desechando el agua del enjuague. Repetir el enjuague con una segunda porción de 100 cm³ de agua purificada.

7.3.3.1 Extracción con agua purificada como disolvente.

Colocar la muestra preparada como se indica en el numeral 7.3.3, en un recipiente adecuado para extracción y añadir 200 cm³ de  agua purificada. Tapar el recipiente para extracción con un vaso  de boca ancha invertido. Introducir el recipiente conteniendo  la  muestra al autoclave y dejar que el líquido dentro del recipiente alcance la temperatura de extracción. Extraer a 394 K ±  2 K (121°C ± 2°C) durante 2 h. Enfriar el autoclave rápidamente a temperatura ambiente.

7.3.4 Preparación del blanco.

Tratar un recipiente para extracción que únicamente contenga agua purificada, sin la muestra, de la misma forma  que  se  indica  en  el numeral 7.3.3.1.

7.3.5 Procedimiento.

Transferir por separado 20 cm³ del extracto de la muestra  tratada con agua purificada y 20 cm³ del blanco correspondiente, a cada uno de dos tubos de comparación de color. En otros tres tubos transferir  por separado 2 cm³, 5 cm³ y 10 cm³ de la solución tipo de plomo.

Añadir a cada tubo 2 cm³ de solución 1 N de ácido acético y ajustar el volumen a 25 cm³ con agua purificada. Añadir 10 cm³  de la solución de ácido sulfúrico a cada uno de los tubos, mezclar y dejar reposar durante 5 min. Hacer la comparación de  color observando los tubos de arriba hacia abajo sobre un fondo blanco.

Determinar la cantidad de metales pesados en el  extracto  de  la muestra y el blanco, en base a la diferencia  en  intensidad  de  color observada en los tubos.

7.3.6 Resultados.

El contenido  de  metales  pesados  es  la  diferencia  entre  la cantidad contenida en el blanco y la cantidad contenida en el extracto de la muestra.

7.4 Determinación de óxido de etileno residual.

7.4.1 Cromatografía de gases.

7.4.1.1 Este método determina el óxido de etileno residual   de una muestra comparando la concentración de la muestra   con otra de referencia, utilizando el cromatógrafo de gases.

7.4.1.2 Aparatos y reactivos.

7.4.1.2.1 Aparato.

7.4.1.2.1.1 Equipo de cromatografía de gases con detector de ionización de flama (DIF), con integrador electrónico.

7.4.1.2.1.2 Jeringas impermeables a gases de 10 µl, 50 µl y 100 µl.

7.4.1.2.1.3 Dos agujas hipodérmicas y un tubo de cloruro de polivinilo (PVC).

7.4.1.2.1.4 Viales para suero con tapones, matraz volumétrico equipado con tapón sellante de teflón.

7.4.1.2.1.5 Microjeringas (5 µl o 10 µl de capacidad).

7.4.1.2.1.6  Horno de laboratorio con capacidad de calentamiento de 373 K (100°C).

7.4.1.2.1.7 Campana con extractor de humo con ventilación adecuada.

7.4.1.2.1.8 Balanza analítica con aproximación de 0.1 mg.

7.4.1.2.1.9 Agitador mecánico.

7.4.1.2.1.10 Válvula reguladora para control de lecturas del frasco conteniendo óxido de etileno.

7.4.1.3 Reactivos.

7.4.1.3.1 Oxido de etileno al 100% (con menos de 120 días de envasado).

7.4.1.3.2 Agua destilada grado USP.

7.4.1.4  Preparación de soluciones estándar.

7.4.1.4.1 Las soluciones estándar son preparadas por dilución de pesos conocidos de gas óxido de etileno y realizando con estas curvas de referencia.

7.4.1.4.2 Para purgar el vial o frasco recolector del óxido de etileno se monta el equipo de acuerdo a la fig. 3 y se deja burbujear el gas a una velocidad de una burbuja por segundo, durante 15 minutos.

7.4.1.4.3 Una vez purgado el frasco recolector se modifica el equipo de acuerdo a la fig. 4, para recolectar en forma líquida el gas óxido de etileno, aproximadamente 10 cm³.

7.4.1.4.4 En un frasco aforado de 100 cm³ con válvula de sello de teflón conteniendo aproximadamente 60 cm³ de agua, colocar 5 gotas de óxido de etileno líquido y empezar nuevamente llenando el frasco a los 100 cm³ de solución. Invertir el frasco y agitar intermitentemente.

7.4.1.5. Diluciones de esta solución.

Son preparadas tomando alícuotas de ella y diluyéndolas.

7.4.1.4.6 De las diferentes diluciones se toman alícuotas de 1 µl a 5 µl  y  se colocan en el cromatógrafo de gases.

7.4.1.4.7 Con los valores  obtenidos  se  procede a  construir  la  curva  de referencia.

7.4.1.5 Procedimiento (ver tabla 6).

7.4.1.5.1 Este procedimiento utiliza las soluciones estándar  preparadas  de acuerdo al numeral 7.4.1.4.5.

7.4.1.5.2 Pesar una muestra de aproximadamente 1 g con aproximación de 0.1 mg y colocarla dentro de un frasco de vidrio  hermético de  volumen apropiado para minimizar el espacio superior.

7.4.1.5.3 Pipetar 5 cm³ de agua destilada dentro del frasco.

7.4.1.5.4 Dejar sellado el frasco por 24 h a temperatura  de 310 K (37°C).

7.4.1.5.5 Por duplicado tomar alícuotas de 1 µl a  5 µl e  inyectarlas al cromatógrafo.

7.4.1.5.6 El resultado obtenido debe estar de acuerdo con lo especificado  en la tabla 1.

7.4.2 Espectrofotométrico.

Se basa en la determinación cuantitativa a través de la espectrofotometría visible del óxido de etileno residual  contenido en aquellos materiales que han sido esterilizados con este gas.

7.4.2.1 Aparatos y equipo.

7.4.2.1.1 Aparato de extracción (véase figura 2).

El aparato está constituido por un matraz balón de fondo  redondo de unos 140 mm  de diámetro y 1000 cm³ de  capacidad,  dotado  de  tres bocas (a, b y c) con juntas esmeriladas destinadas a  colocar  en la boca (b) un refrigerante (B) de 330 mm de longitud, con boca esmerilada 24/40, colocándole arriba en la entrada de aire un tubo capilar, el cual va conectado a un frasco lavador (1) de 200 cm³ de capacidad.

El matraz descansa sobre un calentador redondo (2) y en  la  boca (a) un refrigerante (A) que debe estar orientado a dos frascos (3 y 4) de Deware montados en serie, de 220 mm de altura y 25 mm de  diámetro, los cuales deben contener hielo  picado  y  en  cuyo  interior se encuentran dos frascos (3a y 4a); la boca (c) es para la adición de soluciones. Finalmente un tubo en ángulo unido al frasco (4a) y a un frasco lavador (5) de 200 cm³ de capacidad.

7.4.2.1.2 Estabilización del aparato de extracción.

Introducir en el frasco lavador (1) una solución preparada  por disolución de 1.7 g de clorhidrato de hidroxilamina en 3.3  cm³ de trietanolamina y 100 cm³ de agua.

Colocar dentro del matraz balón (2), de 100 cm³ a 150 cm³ de agua destilada, dentro de los dispositivos (3a y 4a) 40 cm³ de agua a 273 K (0°C) y dentro de frasco lavador (5) 50 cm³ de agua.

Poner a ebullición el contenido del matraz balón hasta  observar en la trampa de agua (5) la salida de burbujas una velocidad  de 4 burbujas, por segundo.

7.4.2.2             Espectrofotómetro de absorción visible equipado con:

7.4.2.2.1          Lámpara de tungsteno.

7.4.2.2.2          Celdas de absorción, de vidrio o cuarzo.

7.4.2.3             Dos refrigerantes (véase figura 2).

7.4.2.4             Dos frascos lavadores (véase figura 2).

7.4.2.5             Dos frascos Deware con un frasco  cada  uno  en  su  interior (véase figura 2).

7.4.2.6             Balanza analítica con exactitud de 0.0001 g.

7.4.2.7             Reactivos y materiales.

7.4.2.7.1          Material usual de laboratorio.

7.4.2.7.2          Matraz de vidrio fondo redondo dotado de tres orificios esmerilados 24/40 (ver figura 2)

7.4.2.7.3          Sal sódica del ácido cromotrópico.

7.4.2.7.4          Tres juntas esmeriladas 24/40, (vease figura 2).

7.4.2.7.5          Clorhidrato de hidroxilamina.

7.4.2.7.6          Tubería de vidrio (véase figura 2).

7.4.2.7.7          Trietanolamina.

7.4.2.7.8          Etilen glicol.

7.4.2.7.9          Solución de hidróxido de sodio 0.5 N.

7.4.2.7.10        Solución de peryodato de sodio  0.1 M.

7.4.2.7.11        Solución de sulfito de sodio al 11%.

7.4.2.7.12        Acido sulfúrico concentrado.

7.4.2.7.13        Solución de ácido sulfúrico 0.5 N.

7.4.2.7.14        Solución de ácido sulfúrico 18 N.

7.4.2.8             Preparación de las soluciones patrón.

Determinar con exactitud una masa de 1.4  g  de  etilen glicol, diluir a 1000 cm³ con agua, tomar una alícuota de 10 cm³ de esta solución y diluir a 100 cm³ con agua.

Colocar en una serie de cinco matraces volumétricos de 100 cm³ alícuotas de 1 cm³, 2 cm³, 3 cm³, 4 cm³ y 5 cm^3, respectivamente, de la solución anterior de etilen glicol. Agregar a cada uno de ellos 2 cm³ de solución de peryodato de sodio 0.1 M, dejándolo en contacto permanente durante un tiempo de 15 min, con agitación frecuente. Adicionar una alícuota de 2 cm³ de solución de sulfito de sodio al 11% y aforar a 100 cm³ con agua.

Transferir una alícuota de 5 cm³ de la  solución  proveniente  del primero de los matraces tratados anteriormente, a un matraz volumétrico de 10 cm³, colocar en hielo, adicionar gota a gota 5 cm³ de una mezcla que contenga 0.10 g de la sal sódica de ácido cromotrópico en 2 cm³ de agua y 50 cm³ de ácido sulfúrico concentrado.

Repetir la misma operación con los cuatro matraces restantes.

Colocar los tubos de ensayo a baño María durante 10 min, enfriar a temperatura ambiente y completar a 10 cm³ con ácido sulfúrico 18 N.

Estas soluciones contienen, respectivamente, el equivalente a  0.5, 1.0, 1.5, 2.0 y 2.5 ppm de óxido de etileno.

7.4.2.9             Preparación de la muestra.

Determinar con exactitud una masa de 16 g de la muestra, recortarla en fragmentos  de  aproximadamente  0.10 g (para  equipos constituidos por varias partes o materiales, se deberán  desechar aquellas que no forman parte integral del equipo,   ejemplo: protectores, envases y otros), y colocarla dentro del matraz balón del aparato de extracción preparado y estabilizado como se indicó en los numerales 7.4.2.1.1 y 7.4.2.1.2.

Destilar de 45 min a 60 min. Transcurrido el tiempo de destilación indicado, desmontar los frascos 3a y 4a y vaciar  su contenido dentro de un matraz de 150 cm³ de capacidad con tapón  esmerilado 24/40. Lavar los frascos vaciando las aguas de lavado en el matraz *). Adicionar 1 cm³ de ácido sulfúrico 0.5 N, cerrar herméticamente el matraz y colocarlo en un baño María en ebullición durante 1 h. Dejar enfriar a temperatura ambiente, neutralizar la solución con 1 ml de hidróxido de sodio 0.5 N y transvasar a un matraz volumétrico de 100 cm³. Lavar el matraz de 150 cm³, vaciar las aguas de  lavado  al  matraz volumétrico *) y aforar con agua. Transferir una alícuota de 5  cm³ de la solución anterior, a un matraz volumétrico de 100 cm³ y continuar  el tratamiento de la muestra de igual manera que  las  soluciones  patrón desde la oxidación periódica (numeral  7.4.2.8).

7.4.2.10           Preparación del blanco.

Colocar en un matraz de 150 cm³ de capacidad con tapón esmerilado 24/40, 80 cm³ de agua, adicionar 1 cm³ de ácido sulfúrico 0.5 N,  cerrar herméticamente el matraz y colocarlo en un baño maría  en  ebullición durante 1 h. Dejar enfriar  a  temperatura  ambiente,  neutralizar la solución con 1 ml de hidróxido de sodio 0.5 N  y  transvasar a un matraz volumétrico de 100 cm³, lavar el  matraz  de 150 cm³, vaciar las aguas de lavado al matraz volumétrico *)  y  aforar a un matraz volumétrico de 100 cm³ y continuar el tratamiento del blanco de igual manera que las soluciones patrón desde la oxidación periódica (punto 7.4.2.8)

7.4.2.11 Procedimiento.

Obtener la absorbancia de las soluciones patrón de referencia, de menor a mayor concentración, a una longitud de onda de máxima absorbancia de  aproximadamente  570 nm  y ajustar el aparato con el blanco. Posteriormente medir la  absorbancia de la preparación de la muestra problema en las mismas condiciones.

7.4.2.12 Cálculos.

Graficar las lecturas de las  absorbancias  obtenidas  con  las soluciones del patrón de referencia, contra sus concentraciones respectivas en óxido de etileno y trazar la curva sabiendo que 1.409 g de etilen glicol corresponden  a 1 g de óxido de  etileno. Para determinar la concentración de óxido de etileno en la muestra, interpolar en la curva patrón la absorbancia  obtenida  y  multiplicar por el factor de dilución obtenido.

7.4.2.13 Interpretación de resultados.

El resultado obtenido no debe ser mayor de 25 ppm.

*) Cuidar que la cantidad de agua utilizada para lavar los frascos 3a y 4a, así como los matraces de 150 cm³ con tapón  esmerilado, mencionados en los numerales 7.4.2.8 y 7.4.2.9, no sobrepasen en total de 100 cm^3, incluyendo muestra.

TABLA 6.

DETERMINACION DE OXIDO DE ETILENO RESIDUAL

Método acuoso para la extracción de óxido de etileno

1.- Procedimiento de extracción

Tamaño de la muestra                      Aprox. 1.0 g

Fluido de extracción                            H₂O agua para inyección

                                                                            (FEUM)

                                     Relación de fluido muestra/extracto

                                    g/cm³)                                                      1:5

Tamaño del vial para el fluido          Volumen adecuado

Temperatura                                        310 K (37°C)

Tiempo                                                  24 h

2.- Procedimiento del gas cromatográfico

Tamaño de la columna                      De vidrio 182.30 cm x 2

                                                                            mm de diámetro interno

Material de empaque                         3% carbowax malla

                                                                            20 cromosorb 101

                                                                            malla 80/100

Gas acarreador                                   Nitrógeno

Rango de flujo                                     35 ml/min

Temperatura de horno                       333 K a 348 K

                                                                            (60°C a 75°C)

Inyector                                                  473 K (200°C)

Detector                                                 523 K (250°C) detector

                                                                            de ionización de flama

Tamaño de las muestras

                                     de inyección                                          3 x 10¹⁰ cm³

8.      ENVASES

8.1    Envase primario para presentación estéril.

Las sondas deberán envasarse en recipientes que garanticen su estabilidad, preserven su calidad y aseguren su esterilidad y permitan ser abiertos sin contaminarse.

El envase primario deberá llevar impreso los siguientes datos:

-        Marca o logotipo del fabricante.

-        Descripción del producto.

-        French o calibre.

-        Número de lote.

-        Fecha de esterilización y caducidad de la misma.

-        "NO SE GARANTIZA LA ESTERILIDAD DE ESTE PRODUCTO  EN  CASO DE QUE EL  ENVASE  TENGA  SEÑALES  DE  HABER   SUFRIDO  RUPTURA PREVIA O AL TERMINO DE 5 AÑOS DESPUES DE LA FECHA  DE ESTERILIZACION".

-        La leyenda "HECHO EN MEXICO" o "HECHO EN" (nombre del país de origen  de la sonda).

-        Número de registro de la Secretaría de Salud.

-        "CONTIENE (número de piezas correspondiente)".

8.2    Envase primario para productos no estériles.

Las sondas deberán envasarse en recipientes que garanticen su estabilidad y preserven su calidad.

El envase primario deberá llevar impreso de origen los datos siguientes:

-        Marca o logotipo del fabricante.

-        Descripción del producto.

-        French o calibre.

-        La leyenda "HECHO EN MEXICO" o "HECHO EN" (nombre del país de origen  de la sonda).

-        Número de registro de la Secretaría de Salud.

-        La leyenda "contenido una pieza".

-        No. de lote.

8.3    Envase secundario.

Los envases secundarios deben permitir el alojamiento del número adecuado de envases individuales o unidades de producto sin deformarlos, éstos deberán llevar impresos los siguientes datos:

-        Marca o logotipo del fabricante.

-        Nombre del producto.

-        French o calibre.

-        Número de lote.

-        Fecha de esterilización y caducidad de la misma. *

-        Número de registro de la Secretaría de Salud.

-        Contenido ___ piezas.

-        Nombre y domicilio del fabricante.

Los envases secundarios deben contener productos del mismo calibre.

8.4    Envase colectivo o corrugado.

El empaque colectivo o corrugado deberá tener una resistencia tal que garantice la protección de los envases secundarios y del producto en sí.

El empaque colectivo o corrugado deberá llevar impreso o en etiqueta los siguientes datos:

-        Nombre del producto.

-        French o calibre.

-        Número de lote.

-        Fecha de esterilización y caducidad de la misma. *

-        Número de registro de la Secretaría de Salud.

-        Nombre, domicilio y marca registrada del fabricante.

-        La leyenda "HECHO EN MEXICO" o "HECHO EN" (nombre del país de origen  de la sonda).

9.  CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES

Esta Norma no concuerda con ninguna norma internacional.

* Aplica solamente a los productos estériles.

10. BIBLIOGRAFIA

10.1 U.S. Pharmacopeia/National Formulary USP XXII/NFXVII 1990.

10.2 Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos, Quinta Edición 1988.

10.3 AAMI Determining Residual ethylene oxide in medical devices.

11. OBSERVANCIA DE LA NORMA

La vigilancia del cumplimiento de la presente Norma corresponde a la Secretaría de Salud, cuyo personal realizará los trabajos de verificación y vigilancia que sean necesarios.

APENDICE A (INFORMATIVO).

ALMACENAMIENTO.

Se debe almacenar en lugares frescos y secos a 298 K (25°C), protegidos de la lluvia y de la exposición directa de los rayos solares, así como de fuentes de calor o vapores.